血液肿瘤流式诊断ldquo分析前环节

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流式细胞术（FC）在造血肿瘤的诊断和监测中已经使用了30多年。最初的研究是使用单抗体或双抗体组合进行的，从而限制了微小异常群体的敏感性。随着新型荧光染料和串联染料的出现，现在可以在单管中使用8-10种抗体轻松进行常规临床分析。尽管外周血和骨髓是FC常规分析的主要样本类型，但几乎所有可以处理成单个细胞的组织、悬浮液以及各种体液（例如脑脊液、胸水和腹水）也可以进行检测和分析。

接下来，我们将分析前、分析中、分析后解释三个环节中常见问题和陷阱做一下阐述，以提升大家对血液肿瘤流式诊断的认知。

今天先归纳一下分析前环节的常见陷阱。

?收集的FC样品应在收集后检查是否有处置不佳的迹象（例如，凝血或溶血的样品可能无法代表疾病状态）。?外周血污染的骨髓标本会显示出杆分粒细胞数量增加，这一点应在最终报告中注明。

?当收集组织样本时，细胞活力通常是一个问题，因此，应在收集后立即将其置于培养基（如RPMI）中，并在标本分析时加入细胞死活鉴别染料（例如7AAD或胺反应性荧光染料）。

流式中文网注：流式中文网原研的FlowGuard?流式专用保存液（I型）经实践数百例样本证明，对于脑脊液样本和细条状活检组织保存效果良好（大块的组织建议剪碎后保存，否则由于内部无法渗入导致保存效果不好），推荐临床使用。不过由于特殊固定作用，同样不能同时使用死活鉴别染料。

?表面检测免疫球蛋白或轻链时，必须先在磷酸盐缓冲液中将样品至少洗涤两次，然后再进行染色。下图可见，增加洗涤步骤对血液样本表面κ和λ染色分离程度的影响。在遇到其它抗体异常或意外的染色模式的情况下，清洗去除血浆成分可能会改善数据质量。?根据患者的疾病状态或药物治疗不同，某些样品可能显示出对红细胞（RBC）裂解抵抗。下图显示的是样本中红细胞裂解不全的情况。这时，有两种解决方案可以试试：在裂解时升高孵育温度可能会增加RBC裂解能力；另外，涡旋震荡样本可以增强RBC裂解。?通常的操作是，首先将抗体添加到染色试管中，然后将样品分配到试管中。如果不仔细进行混匀操作，则样品的一部分可能无法与抗体很好地反应。这不仅在白细胞染色中，在RBC染色中也可以看到，例如，在阵发性夜间血红蛋白尿（PNH）中检测糖基磷脂酰肌醇（GPI）缺陷的细胞时，可能因为这种未混匀导致部分细胞不能充分染色，导致正常红细胞被错误地归类为含有GPI缺陷的细胞。下图呈现的就是这种情况，右侧是相同样品的重复检测，确保了血液和抗体都在管的底部，并且管壁上没有红细胞。?另一个值得

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